Q-瓊脂糖凝膠HP是將季銨基團鍵合在瓊脂糖微球上形成的一種強陰離子交換介質。具有高分辨率,高載量,回收率高和再生能力強等特點。化學穩定性好,可用氫氧化鈉在位清洗。基質的親水特性保證在洗脫過程中減少細胞衍生雜質的非特異性吸附。可用于蛋白質、核酸及多肽的離子交換制備。 Q-瓊脂糖凝膠HP
產品簡介
Q-瓊脂糖凝膠HP是將季銨基團鍵合在瓊脂糖微球上形成的一種強陰離子交換介質。具有高分辨率,高載量,回收率高和再生能力強等特點。化學穩定性好,可用氫氧化鈉在位清洗。基質的親水特性保證在洗脫過程中減少細胞衍生雜質的非特異性吸附。可用于蛋白質、核酸及多肽的離子交換制備。
產品參數
產品名稱:Q-瓊脂糖凝膠HP (Q- Sepharose High Performance)
貨號:S9200
基質:6% 交聯瓊脂糖凝膠
配基:季銨
交換基團:- N+(CH3)3
離子容量:0.14-0.20 mmolCl-/mL
顆粒大小:34μm
蛋白載量:10mg lgG,24mg HAS/mL
工作pH:1~14(短時間 ,在位清洗);2~12(長時間)
化學穩定性:在以下溶液中穩定- 1mol/L NaOH;8mol/L尿素;6mol/L鹽酸胍;30%異丙醇;70%乙醇;30%SDS,30%乙腈;
使用方法
1. 裝柱
(1) 將所有的試劑和填料達到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
(2) 根據柱子大小取所需凝膠的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
(3) 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
(4) 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意不要使用氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(5) 打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如:Tris、PBS等。
3. 上樣
(1) 樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心、過濾后上柱;
(2) 一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡洗液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
(3) 介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質、流動相的離子強度和pH值。鹽濃度越小,介質對組分吸附越牢。
4. 洗脫
Q瓊脂糖凝膠介質可用增大鹽濃度或減小pH值進行洗脫,常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5. 再生
一般用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。
若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
(1) 對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
(2)對沉淀蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質,可用1M NaOH去除。
(3)對強疏水性結合的蛋白、脂類等,可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡。
清洗完畢后,用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
7. 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5-6小時或者用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下步驟去除:
(1) 2倍柱體積的70%的乙醇;
(2) 2倍柱體積50Mm Tris-HcL Ph7.5
(3) 1倍柱體積4M尿素
(4) 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8. 消毒
用0.5-1.0 M NaOH 室溫下洗8-10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
注意事項
(1) 密封貯存于4°C-28°C(保存溶液為20%乙醇),通風、干燥的地方,不能冷凍。用過的柱子貯存于4°C(20%乙醇)。
(2) 在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。
備注:產品信息可能會有優化升級。請以實際標簽信息為準。
Q-瓊脂糖凝膠HP
Q-瓊脂糖凝膠HP