是一種用于從鵝外周血中分離中性粒細胞的試劑盒,其主要組成包括試劑A、試劑C、細胞洗滌液、紅細胞裂解液和全血及組織稀釋液。 鵝外周血中性粒細胞分離液試劑盒
產品分類
注意:本產品試劑組分和操作步驟發生變化,使用前請仔細閱讀說明書。
保存:本產品對光敏感,應該室溫避光儲存,保質期 2 年。無菌開封后,保存于室溫。
試劑盒組成:
試劑 A 200mL 室溫避光
試劑 C 100mL 室溫避光
紅細胞裂解液 100mL 室溫
細胞洗滌液 200mL 室溫
操作步驟一:
紅細胞沉降(僅供參考) 沉降去除紅細胞:取新鮮抗凝血與血液稀釋液(注射用生理鹽水或 1XPBS)及紅細胞沉降液按照 1:1:1 比例混勻,室溫下靜置 30-40min 后,可見紅細胞沉于試管底部,小心吸取上清層(富含白細胞及血 小板)用于后續細胞分離。
操作步驟二:
樣本分離(僅供參考)
1. 樣本分離:當樣本體積小于 5mL 時,先在離心管中先加入 4mL 試 劑 A,后將 2mL 試劑 C 小心疊加于試劑 A 之上,形成梯度界面(樣本 體積大于等于 5mL,試劑 A 與試劑 C 比例 2:1,試劑總量等于沉降后 樣本含量),將懸液小心平鋪于分離液液面上方。由于密度差異,可見 明顯的分層界面(注意二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則 會影響分離效果)。
2. 室溫條件下水平轉子 600-1000g ,25-30min(血液體積越大所需離心力越大,離心時間越長,最佳分離條件需摸索,離心最大轉速不超過 1000g)。
3. 離心后,離心管中可見兩個環狀乳白色層,上層為單個核細胞層,下層即所需中性粒細胞層(受 個體差異及分離條件影響,粒細胞白膜層可能會出現顏色較淺的情況)。
4. 用吸管吸取下層中性粒細胞白膜層至新的離心管中,加入 10mL 細胞清洗液洗滌細胞,250g,離 心 10min。
5. 棄上清,加入 5mL 細胞清洗液重懸細胞,250g,離心 5min。
6. 棄上清,重懸細胞備用。
注意事項:
A.開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免 微生物污染。
B.分離液使用時應始終保持室溫(18℃~25℃),如室內溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是 溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層不清晰。
C.血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血 2h 以內),為保持中性粒細胞的活性,應避免冷凍和冷藏。
D.稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集, 大大降低細胞得率及純度。
E.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導致細胞掛壁,影響分離效果。
F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調節離心轉數和離心時間,摸索 最佳的分離條件。
G.如果要進一步對分離的細胞進行培養,注意全程保持無菌操作,避免微生物污染。
H.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。
鵝外周血中性粒細胞分離液試劑盒
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