細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。因此，Tunel成為了檢測DNA片段化（細胞凋亡）的常用方法。

Tunel檢測試劑盒（綠色熒光）可以通過一步反應將熒光素標記的dutp結合到3'-末端，使熒光素結合到DNA上，從而達到凋亡細胞的原位標記。

Tunel檢測試劑盒（DAB顯色法）可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的催化作用下，將3'-OH末端與與生物素（Biotin）-dUTP結合，然后通過親和素和生物素反應，將HRP酶標記到DNA的3'-末端，最后通過DAB顯色，進行凋亡細胞標記，在光學顯微鏡下可以直接觀察。

①安全性佳：工作液內不含二甲申酸鈉等危化成分，配方簡單安全且操作簡單；

②特異性好：不易出現假陽性等情況，熒光陽性信號強；

③適用性廣：適用于凋亡細胞或石蠟組織切片檢測以及流式檢測等實驗。

 

G4890

Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光）
規格	價格
20T/50T	￥1640/3280

 

G4891

Tunel細胞凋亡檢測試劑（DAB顯色法）
規格	價格
20T/50T	￥1500/3000

 

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常見FAQS:

 

Q1: Tunel染色陽性信號弱？

 

可能原因

1. 組織或細胞通透不夠導致后續酶和熒光素無法進入細胞內標記到DNA上；

2. 細胞或組織凋亡程度不夠，常規37℃反應1h達不到預期；

3. 蛋白酶K修復后洗脫不充分，導致后續熒光標記效果不佳；

4. 試劑失效或熒光素猝滅。

解決方案

1. 合理把控通透時間：對于細胞，適當延長通透時間增加通透性；對于不同組織，選擇合適的蛋白酶K修復時間，一般3-4μm石蠟切片室溫修復10min即可；

2. 調整優化細胞凋亡誘導方案，在常規反應時間上增加至2-3h；

3. 增加修復后洗滌次數和時間，確保蛋白酶K洗脫充分；

4. 選擇保質期新鮮的試劑盒用于實驗。

 

 

Q2: Tunel染色全陽性？

 

可能原因

1. 曝光時間過長導致大面積陽性信號；

2. 樣本處理方法不對，陽性對照DNase處理過度；

3. 某些組織凋亡程度高，常規37℃反應1h反應過度。

解決方案

1. 選擇合適的曝光時間；

2. 可以調整DNase的稀釋比例，增大稀釋比從而減少陽性率；

3. 選擇一個陽性對照切片，37℃反應1h觀察陽性率。

 

 

Q3: Tunel染色結果背景和非特異性熒光強？

 

可能原因

1. 染色操作過程中出現干片現象導致背景熒光強；

2. 漂洗次數不足，未能洗脫背景熒光著色；

3. 血細胞、肌纖維等存在自發熒光，導致非特異著色；

4. 曝光時間長；

5. 工作液混勻不充分，探針未能均勻溶解，導致非特異性熒光雜點。

解決方案

1. 染色過程中，暫停操作時，建議滴加1×PBS保持樣本濕潤，同時用免疫組化筆圈下組織，減少液體流失；

2. 增加工作液孵育后漂洗次數和時間；

3. 制備切片前對組織進行充分灌注或者采用自發熒光猝滅劑處理組織切片；

4. 提高分辨率，調節黑平衡或降低曝光時間。