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動物基因組DNA提取方法及步驟介紹

更新時間:2025-09-24點擊次數:71

基因組DNA提取是最常見分子生物學實驗之一。今天給大家介紹的是動物基因組DNA提取。DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構建等實驗,獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術中最重要、最基本的操作之一。

動物基因組DNA提取實驗步驟:

1、取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g(0.5cm3),盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中,加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊,轉入1.5ml 離心管中,加入蛋白酶K (500ug/ml)20μl,混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min,也可轉入37℃水浴12~24h,間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min,取上清液入另一離心管中。

2、加2倍體積異丙醇,倒轉混勻后,可以看見絲狀物,用100ul 吸頭挑出,涼干,用200ul TE 重新溶解。(可進行PCR反應等,需要進一步純化的按下列步驟進行)

3、加等量的酚:氯仿:異戊醇振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。

4、取上層溶液至另一管,加入等體積的氯仿?異戊醇,振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。

5、取上層溶液至另一管,加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇,混勻后室溫沉淀2min ,離心12000 rpm ,10min。

6、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉。

7、用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次,離心12000 rpm , 5min。

8、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉,室溫干燥。

9、加200ul TE重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?C20℃保存備用。

10、吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

在動物基因組DNA提取試驗中要特別注意以下幾點:

1、盡量簡化操作步驟,縮短提取過程。

2、減少化學因素對核酸的降解。

3、減少物理因素對核酸的降解:機械剪切力和高溫。

4、防止核酸的生物降解:排除核酸酶。 


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