Q1

什么是脂類？

脂類是脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）的統稱，它是構成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精等脂溶劑中。脂類與蛋白質、碳水化合物是人體的三大營養素，其主要功能是儲能和供能。

脂滴（Lipid Droplet）是中性脂（主要為甘油三酯和酯化膽固醇）的主要貯存場所，是脂肪細胞的主要成分。正常情況下，除脂肪細胞以外，常規細胞胞質內不見或僅能看到微量脂滴。

Q2

為什么要進行脂類染色？

Q3

常用的脂類染色方法有哪些？

目前常用于脂類染色的有經典蘇丹染色、油紅O染色以及尼羅紅熒光染色。脂類染色常規適用樣本包含速凍、冰凍的動植物切片以及成脂誘導培養細胞。

經典蘇丹染料包括蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ和蘇丹黑B，是常用的經典脂質染料，可顯示動物組織的脂質積累和植物組織的木栓化，也可用于掩蓋組織脂褐素的自發熒光。

油紅O屬于新一代蘇丹脂質染料，其著色較經典染色法更深，特異性也更好。在觀察動脈粥樣硬化斑塊以及肝臟和肌肉脂質積累方面具有很好的效用。G1263型改良油紅O染色試劑盒（環保型）在經典異丙醇法的基礎上進行了優化更新，解決了染色液易揮發、染料易沉淀的關鍵難題，極大的降低了染色難度。

尼羅紅能與脂類物質結合并發出熒光，在530 nm波長激發下，顯示強烈桔紅色熒光。染色過程中基本不含有機試劑，對微小脂滴的定位和顯示效果較好。可用于組織切片和培養細胞的脂類染色，對脂滴進行原位標記，并可搭配DAPI進行形態學觀察。

Q4

非常規的脂類染色方法有哪些？

Q5

樣本如何固定以及染色后如何封片？

固定：樣本可不固定直接切片染色，如需固定則不能使用高濃度小分子醇、酮類的固定液固定，如丙酮和甲醇、乙醇會將脂滴從切片上洗脫從而不利于脂質染色，建議使用甲醛類水性固定液，甲醛固定對組織形態保存效果更佳。

封片：對于組織切片和細胞爬片，可以使用S2150甘油明膠、抗熒光衰減封片劑等水性封片劑封片，封片后及時拍照留存；對于培養板細胞，建議染色、清洗后不要晾干，使用1×PBS或ddH₂O覆蓋細胞表面，保持細胞濕潤，然后在鏡下觀察拍照，晾干會導致鏡下脂滴發黑影響觀察。

Q6

如何對脂質染色結果進行分析？

細胞：細胞經染色和洗滌之后，可以使用純的丙酮或異丙醇等脂溶性溶劑提取出脂質結合染料，然后轉移至檢測板中在510-520nm測定吸光度。吸光度與樣品的脂質含量成正比，并可間接用于評估脂肪生成。

組織：可以使用圖像分析軟件，對脂滴著色面積進行識別計算，除以總面積從而獲得脂滴含量。