羥自由基清除能力測定試劑盒使用說明書

產品說明：羥自由基作用于體內蛋白質、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體內代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。 H2O2/ Fe2+ 通過 Fenton 反應產生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為 Fe3+ ，導致 536nm 吸光度下降，樣品對 536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

操作步驟：

一、 樣品的制備：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。

二、 操作步驟

1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長 536nm，蒸餾水調零。

2、 操作表空白管 對照管 測定管試劑一（μL） 30 30 30

試劑二（μL） 80 80 80

試劑三（mL） 20 20 20 立即混勻，防止局部顏色過濃樣品（μL） 50 試劑四（μL）

20 20 H2O（μL） 70 50 混勻 37℃，60min，于微量石英比色皿/96 孔板中測定 536nm 處吸光值，空白管、對照管和測定管的吸光值分別記為 A 空、A 對和 A 測。 注意：空白管和標準管只需測定一次。

計算公式：羥自由基清除率 D% =（A 測-A 對）÷（A 空-A 對）×100% A 空、A 對、A 測：空白管、對照管和測定管的吸光值。注意事項：為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。

產品內容：標準液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：

液體 3mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。