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胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
2025-09-22
應用：胸腺嘧啶核苷為生化試劑，制備生物培養基，例如HAT選擇性培養基的制備。原理：在單抗制備中，由于需要進行選擇性殺死非目標細胞，所以使用添加HAT的選擇性培養基，其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（“D途徑”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中，葉酸作為重要的輔酶參與這一過程，而HAT培養液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物，可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應急途徑或補救途徑（“S途徑”），它...
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簡述TBST緩沖液的配制及應用
2025-09-22
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20這三種物質，是做WESTERNBLOT中常用的一種緩沖液。TBST緩沖液的配制1000ml×TBST的配置先稱量NaCl40g，倒入燒杯中，加DDW蒸餾水400ml,再稱量NaCl47.6g，倒入剛才的那個燒杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次稱量不方便，所以分兩次稱量，且易于溶解）。往燒杯中加入Tris—HCl緩沖液100ml，最后加（吐溫20）5ml,轉入1000ml容量瓶中，在定容，轉移即可。TBST緩沖液的應用...
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DMEM培養基中DMEM粉劑配制方法步驟
2025-09-22
DMEM是現今細胞培養中比較常見的培養基之一，dmem培養基是建立在MEM培養基的基礎上研究出來的，它與MEM培養基相比較，DMEM培養基中加大了MEM培養基中各種成分的用量，下文主要介紹一下自己配制DMEM的方法。1制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。2稱取所需量的干粉培養基，加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個包裝的培養液，在將整個包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內面2次，倒入培養液中，以保證所有干粉都溶解成培養液。磁力攪拌或人工攪拌使之充分溶解。3根據包裝...
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簡述tbst與pbst的區別及配置
2025-09-22
TBST是TBS+Tween的縮寫，生物實驗中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst與pbst都有上面區別呢？tbst與pbst的區別：1、TBST的pH值隨溫度變化大一點，而PBST似乎容易有沉淀，若稀釋抗體后需要反復使用的話建議使用TBST溶解。2、兩種洗液用起來沒有什么區別，都是提供一個緩沖的PH值環境，加上吐溫20有助于蛋白的洗脫。PBST的磷酸鹽緩沖液加Tween-20，而TBST是Tris緩沖液加Tween-20。PBS溶液是指磷酸緩沖液(...
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剛果紅培養基的配方及原理
2025-09-22
纖維素剛果紅培養基用于纖維素分解菌的分離和鑒別，纖維素分解菌周圍有紅色分解圈。剛果紅培養基的配方：硝酸鈉1.0磷酸氫二鈉1.2磷酸二氫鉀0.9硫酸鎂0.5氯化-鉀0.5酵母浸出粉0.5酸水解酪蛋白0.5剛果紅0.2纖維素粉5.0瓊脂15.0pH值7.0±0.125℃剛果紅培養基的用法：稱取本品25.3g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。纖維素剛果紅培養基篩選菌種的原理:1、剛果紅可以跟大分子多糖牢固結合。2、纖維素是大分子多...
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活性氧檢測試檢測的工作流程步驟
2025-09-10
活性氧檢測試檢測的工作流程步驟活性氧檢測試檢測流程：從探針加載到信號輸出探針加載（細胞預處理）步驟：將細胞接種于培養板（如96孔板），待貼壁后更換無血清培養基（避免血清干擾）。加入終濃度為5-20μM的探針（如DCFH-DA），37℃孵育20-30分鐘。關鍵點：探針濃度需優化：過高導致背景噪聲，過低降低靈敏度。避光操作：熒光探針易被光淬滅，需用錫箔紙包裹培養板。ROS誘導（刺激處理）目的：人為提高細胞內ROS水平，模擬病理或應激狀態。常用刺激物：氧化劑：H?O?（100-50...
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RNA的提取方法大總結
2025-09-02
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質在上清中。使用這種方法，不但能得到高質量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞（如胰腺）的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細...
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從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項
2025-09-02
在分子生物學實驗中，我們通常需要分離純化特定分子量的DNA片段，用于接下來的實驗，比如酶切、連接的工作。下面主要介紹從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項，其主要原則有兩項：1、去除DNA樣品中的雜質：瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的，其中含有較多的酸根和羥基多糖。目前大多數級別的瓊脂糖中含有硫酸酯多糖，這種物質能抑制基因克隆中使用的多種工具酶的活性，如DNA限制性內切酶、連接酶等，在回收DNA時應盡量減少這些物質的污染。不管用哪種方法進行回收DNA，都會用到2.5mol/L...
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